CCK8检测实验报告和详细的实验步骤由东极生物病理实验平台为大家总结分享。东极生物为广大科研人员提供长期稳定的 CCK8检测外包实验服务，本文给大家分享咱们技术长期总结下来的关于 CCK8检测实验报告和详细的实验步骤

一、实验目的：

通过CCK8方法检测细胞的增殖情况，了解细胞的生长动态。

二、实验原理

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

三、实验步骤

3.1 细胞复苏

(1)将ddH2O预温至37℃。

(2)戴上手套和口罩帽子，从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管（内有1 mL细胞混合液），立即投入37℃ ddH2O中，轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。

(3)完全溶解后，75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。

(4)在超净台中，在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基，打开冻存管，将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中，常温1000 rpm离心3分钟，吸除上层的培养液。

(5)1ml培养基重悬细胞沉淀，轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中，补足培养基至5 mL，置于37℃、5% CO2培养箱培养。

(6)48小时后换液，细胞融合接近80%时即可传代。

3.2 细胞培养

THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37细胞用含10%胎牛血清、1%双抗的1640培养基，在37℃饱和湿度、含5% CO2的培养箱中培养。

3.3 细胞铺板

(1)取对数生长期THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37细胞，细胞计数。

(2)将细胞种到96孔板中，密度为20000个细胞/孔，继续培养。

(3)待细胞贴壁后，0、24、48、72h后进行cck8检测。

3.4 CCK8检测实验步骤

(1) 各组细胞在检测时间点时，每孔加1/10体积 CCK8，在37℃、5％CO2培养箱中培养3小时；

(2) 选择450 nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，OD值为纵坐标绘制折线图。

文章出自：验外实包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/